[摘要]
目的 探讨脓毒症大鼠心肌纤维化和Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的关系及吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)对脂多糖刺激的大鼠心肌成纤维细胞的干预作用。方法 将大鼠原代心肌成纤维细胞复苏后,等待细胞贴壁生长至镜下视野内贴壁细胞大于90%后,按1∶3的比例传代培养。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测第3代细胞在不同浓度脂多糖和PDTC干预下的细胞增殖活力。传代培养并取第3代细胞分为对照组、脂多糖组、PDTC组,对照组细胞培养瓶内加入50 μl的二甲基亚砜(DMSO)和4 950 μl的完全培养基, 脂多糖组细胞培养瓶内加入50 μl的DMSO和4 900 μl的完全培养基以及1 mg/L的脂多糖原液50 μl,PDTC组加入10 mmol/L的PDTC溶液50 μl和4 900 μl的完全培养基以及1 mg/L的脂多糖原液50 μl。比较各组细胞增殖活力和炎症介质水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞中TLR4、NF-κB-p65和磷酸化NF-κB-p65(p-NF-κB-p65)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原和TGF-β1的mRNA相对表达量。结果 以脂多糖浓度为0 mg/L的对照组细胞增殖活力为参照,其他不同浓度脂多糖组的细胞增殖活力均高于对照组(均P<0.001)。以含1 mg/L脂多糖的完全培养基为基础再使用不同浓度的PDTC干预24 h,结果显示各浓度PDTC组细胞增殖活力均明显低于脂多糖组(均P<0.001)。脂多糖组IL-6和TNF-α蛋白表达水平均明显高于对照组[(2.02±0.37)比(1.00±0.00)、(2.00±0.38)比(1.00±0.00)](均P<0.05),PDTC组IL-6和TNF-α蛋白表达水平[(1.05±0.19)、(0.72±0.40)]均明显低于脂多糖组(均P<0.05)。脂多糖组TLR4/NF-κB信号通路TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB-p65/NF-κB-p65比例均明显高于对照组[(1.51±0.06)比(1.00±0.00)、(1.96±0.38)比(1.00±0.00)](均P<0.05)。PDTC组TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB-p65/NF-κB-p65比例[(0.88±0.24)、(0.72±0.40)]均明显低于脂多糖组(均P<0.05)。脂多糖组TGF-β1蛋白和mRNA表达水平及Ⅰ型胶原 mRNA表达水平均明显高于对照组[(2.18±0.24)比(1.00±0.00)、(1.24±0.25)比(1.00±0.00)、(4.70±0.52)比(1.00±0.00)](均P<0.05)。PDTC组TGF-β1蛋白和mRNA表达水平及Ⅰ型胶原 mRNA表达水平[(1.52±0.29)、(1.12±0.02)、(2.28±0.66)]均明显低于脂多糖组(均P<0.05)。结论 PDTC可抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低脂多糖刺激的大鼠心肌成纤维细胞的增殖以及炎症介质和纤维化标志物的表达,进而抑制纤维化进程。